PgP - o46 Quantificação de ácidos lipoteicóicos na matriz extracelular de biofilmes cariogênicos

Abstract

Os exopolissacarídeos são componentes fundamentais na construção da matriz extracelular (MEC) de biofilmes cariogênicos. Porém, ácidos lipoteicóicos extracelulares (ALT) e DNA extracelular (eDNA) também podem ser detectados na MEC e portanto, ter papel importante na construção da matriz e desse biofilme. O objetivo foi desenvolver um método efetivo para quantificação de ALT na matriz extracelular de biofilmes cariogênicos. Biofilmes monoespécie de Streptococcus mutans UA159 e mistos (com UA159 cepa parental ou mutantes, Actinomyces naeslundii ATCC12104 e Streptococcus gordonii DL-1) foram formados sobre discos de hidroxiapatita, com película, em meio com saliva e 0,1% de sacarose, alternado com 0,5% sacarose + 1% amido (37°C/ 5%CO₂). Para modular os componentes da matriz foram utilizadas cepas mutantes knockout de S. mutans dos genes lytTS (DSMU.525 e DSMU.526 - eDNA), do operon dltABCD (DSMU.1538 e DSMU.1541 – ácido lipoteicóicos) e gtfB (exopolissacarídeos insolúveis). Na idade 115 h, cada biofilme foi processado e a porção solúvel da MEC foi tratada com 5% de ácido tricloroacético para isolamento de ALT, que foi detectado e quantificado via ELISA. Para tanto, amostras de ALT foram imobilizadas em microplacas, seguida de incubações com anticorpo primário (MA1-7402) e secundário conjugado com HRP (A16072), sendo revelado com H₂O₂ e leitura a 405 nm. Observou-se uma tendência de maior quantidade de ALT na MEC de biofilmes monoespécie sendo maior a cepa parental, e mutantes gtfB e as cepas associadas ao ALT (operon dltABCD). A menor quantidade foi detectada para cepas mutantes dos genes lytTS(sendo 73-75% vs. cepa parental). O comportamento foi similar para o biofilme misto, mas com menor quantidade que a detectada em biofilmes monoespécies. Portanto, o método desenvolvido para processar, detectar e quantificar o ALT foi efetivo.

Descritores: Streptococcus mutans; Ácidos Lipoteicóicos; Matriz Extracelular.

Agradecimentos/Apoio Financeiro: FAPESP (Processos 2014/05423-0 e 2014/21355-4)